mNeonGreen 荧光蛋白的定向进化
摘要
mNeonGreen 是一种黄绿色荧光蛋白，是现有的最亮的单体荧光蛋白。它源自四聚体 LanYFP， 这是已知最亮的天然荧光蛋白。LanYFP 起源于头索动物 Branchiostoma lanceolatum，通过诱变定向进化成为 mNeonGreen。由于其令人印象深刻的荧光特性，mNeonGreen 在充当体内成像和 FRET 的融合标签等任务中 表现出色。然而，它的特性可以进一步扩展，以适应更广泛的生物研究领域。该项目旨在使用易错 PCR(EPPCR) 在野生型 mNeonGreen 基因中产生随机点突变，以产生具有改进特性的新版本蛋白质。由此产生的突变 体 mNeonGreen 基因包含一个过渡突变，导致荧光蛋白外部桶状结构上的极性氨基酸被疏水性氨基酸取代，同 时使发色团区域保持不变。这导致蛋白质稳定性较差，因为表达突变体 mNeonGreen 的大肠杆菌的光漂白半 衰期减少。表达突变体 mNeonGreen 的大肠杆菌的成像样本显示，由于荧光蛋白浓度较高，荧光大大增加。 与野生型 mNeonGreen 相比，突变型 mNeonGreen 的荧光分光光度分析显示荧光强度、pH 敏感性 (pKa) 或 激发 / 发射光谱没有差异。因此，研究人员假设涉及 mNeonGreen 发色团区域周围区域的突变更有可能产生 mNeonGreen 变体。将来，也许定点诱变可能有助于特异性靶向 mNeonGreen 的发色团区域，以产生新的变体。参考
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